НОВЫЙ СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ОНКОЗАБОЛЕВАНИЙ У ЖИВОТНЫХ

Авторы: Янковский Г.М. ^1*, Градюшко А.Т.¹, Зонтов С.В.², Павлов В.А. ², Прокопцева О.С.³, Котович Ю.В.³

¹НИИ Канцерогенеза РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, ²Отдел лабораторных животных РОНЦ

  им. Н.Н. Блохина РАМН, ³ООО «Иммуновет», г. Москва,  ⁴МИФИ.

*e-mail: gyankovskii@mail.ru

В работе  впервые представлены результаты апробации лабораторной методики, которая позволяет с чувствительностью и специфичностью более 90% диагностировать развитие онкологических заболеваний основных этиологий у животных.  Методика изначально была разработана как скрининговая, для выявления онкологических заболеваний на ранних стадиях у людей.  В данный момент методика проходит клинические испытания в НИИ Канцерогенеза. В работе представлены результаты адаптации методики  для выявления онкологических заболеваний у животных. Диагностика онкозаболеваний основана на выявлении в сывортке крови не референтных комплекcов с размерами ~ 600-8000 нм. устойчивых к воздействию специального раствора при нагреве до 70-90^оС.

Для получения информации о субфракционном составе молекулярных, надмолекулярных и комплексных ингредиентов сыворотки крови в интервале от 8 до 10000 нм. используется метод лазерной корреляционной спектроскопии. Экспериментальные данные - результат математической обработки лазерных корреляционных (ЛК) спектров, для наглядности представлены в виде гистограмм, представляющих собой распределение частиц разного размера по их вкладу в суммарный эффект интенсивности светорассеяния.

Особенности метаболизма опухолевых клеток обуславливают синтез веществ разной природы, но при всех видах злокачественных опухолей в биологические жидкости выделяется неспецифический комплекс онкомаркеров. Установлено, что опухолевая клетка способна выделять около 1 пикограмма опухолевого маркёра в кровь. Экспрессия высокомолекулярных белковых фракций характерна для злокачественного роста опухолей любых локализаций и различного гистогенеза. Низкая иммуногенность белков комплекса обеспечивает их накопление в биологические жидкости на самых ранних стадиях заболевания. Гистограмма распределения по размерам компонентов биологических жидкостей здоровых и животных имеющих опухоли жывотных сильно отличается, это  и служит диагностическим критерием. Предлагаемый метод диагностики является универсальным, простым в исполнении, и как показывают результаты, достигнутые на сегодняшний день, достаточно специфичным и чувствительным (более 90%). В сыворотке крови онкобольных животных присутствуют высокомолекулярные не референтные комплексы с характерными размерами, превышающими 600 нм.(рис.1), в то время как распределение белков сыворотки крови  здорового животного лежит в диапазоне от ~8 нм.  до ~80 нм.(рис.2.)

Рассмотрим рисунки 1 и 2, на них представлены гистограммы распределения частиц сыворотки  крови по размерам, в зависимости от их вклада в светорассеяние. На рисунке 1 представлено распределение частиц в сыворотке крови собаки больной раком молочной железы. В сыворотке крови присутствуют высокомолекулярные не референтные комплексы с размерами превышающми 600 нм. Следует отметить, что концентрация частиц с размерами около 1000 нм. на 4 порядка ниже концентрации частиц с размерм 10 нм. На рисунке 2 представлено распределение белков сыворотки крови здоровой собаки. Такое распределение можно считать эталонным, все частицы лежат в диапазоне от ~8 до ~70 нм. Как видно из рисунков, гистограмма распределения по размерам компонентов биологических жидкостей здоровых животных и животных с онкологическими заболеваниями сильно отличается, эти отличия и служат диагностическим критерием. Предлагаемый метод диагностики является не специфичным относительно разных этиологий онкозаболеваний, простым в исполнении, и наглядным. Метод позволяет выявлять онкозаболевания различных этиологий на ранних стадиях,  а также диагностировать генерализацию опухолевого процесса или развитие процесса метастазирования в период реабилитации.

Кроме диагностики онкозаболеваний, методика может быть эффективно использована для интегральной оценки гомеостаза. Рассмотрим пример, на рисунке 3 представлено распределение частиц сыворотки крови собаки, хозяева которой имели жалобы на аллопецию и нарушения кожных покровов животного. Гистограмма на рисунке 3 соответствует распределению белков до, а на рисунке 4, после оздоровления с помощью индивидуального подбора системы питания. Выявление аллергии и пищевой непереносимости проводилось ООО «Иммуновет» методом (ИФА/ELISA). Гистограмма на рисунке 4 была получена спустя 3 месяца после того, как была изменена программа питания.

Основная масса домашних животных имеет функциональные нарушения организма. Задача хозяев, с помощью индивидуально подобранной программы оздоровления, вернуть организм животного к нормальному функционированию. Одним из основных критериев того, что процесс оздоровления идёт успешно будет возврат состояния белкового распределения к стандарту здорового состояния (рис. 4).  

Заключение.

В работе впервые представлена простая в реализации методика по выявлению онкозаболеваний различных этиологий у животных. Методика не является специфичной относительно отдельных нозологий онкологических заболеваний, зато может быть эффективно использована в клинической практике ветеринарами как для первичного выявления онкозаболеваний, так и  для отслеживания эффективности терапий. Тест на основе разработанной методики позволяет диагностировать возникновение генерализации заболевания и развитие процесса метастазирования. Всего, при первичном обращении, и в период реабилитации рекомендуется проведение минимум 2-3 анализов с помощью разработанной методики. Первый анализ фиксирует отклонение распределения белков сывортки от стандарта здорового состояния. Последующие анализы фиксируют положительную тенденцию в изменении распределения белков, в случае правильно подобранной системы оздоровления. Разработанная методика позволяет не только выявлять развитие онкозаболеваний на ранних стадиях, но и является эффективным и наглядным инструментом интегральной оценки гомеостаза.